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蛋白纯化

蛋白纯化是指从复杂混合物或粗料中分离出蛋白。蛋白纯化可用于分析蛋白结构、功能或相互作用,并用于药物制备,例如生产抗体药物。纯化过程利用物理化学属性(例如生物活性、结合亲和力或大小)的变化将目标蛋白与混合物中的其他分子分离。常用纯化技术包括亲和层析、尺寸排阻层析和疏水相互作用层析。

亲和层析

亲和层析是一种依靠抗体或其他蛋白与亲和配基的特异与可逆结合的液相层析。配基可偶联基质(例如圆珠型填料或电纺纤维)用作液相层析中的固定相。然后使含有目标生物分子的混合物或流动相流过固定相。配基会结合并留住目标分子,同时经过一系列清洗步骤洗脱混合物中的其他分子。

亲和力标签

有些蛋白(例如单克隆抗体)可通过与配基(例如蛋白 A)结合进行纯化。另外一些蛋白的纯化可能需要蛋白与亲和标签(一种可以结合特异性配基的多肽序列)进行融合。分离后,可使用酶或其他化学试剂处理标签蛋白质以去除亲和标签。生物制造和研究中常用的一些蛋白标签包括组氨酸、谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 和 Strep-tag™ II。

标签蛋白质常见问题解答

以下时一些关于纯化标签蛋白的常见问题解答。

什么是亲和标签蛋白?

亲和标签蛋白是融合了亲和标签(如组氨酸、GST 或 Strep-tag™ II)的蛋白,可以提高纯化效率。

如何洗脱带 GST 标签的蛋白?

带 GST 标签的蛋白层析纯化是依靠 GST 亲和吸附于与基质(如 Sepharose™ 填料)进行偶联的谷胱甘肽的作用。亲和基质捕获的带 GST 标签的蛋白用含有还原型谷胱甘肽的洗脱缓冲液洗脱。Cytiva 提供的 GST 缓冲液试剂盒可用于带 GST 标签的蛋白的结合、洗涤和洗脱。

什么是带 his 标签的蛋白?

带组氨酸标签(his 标签)的蛋白与一系列多组氨酸残基融合,可以进行高效纯化和检测。

如何为亲和标签蛋白选择正确的层析柱或填料?

Cytiva 的 Purify app 可帮助您选择正确的预装填层析柱或填料来纯化目标蛋白。