免疫共沉淀

什么是免疫沉淀？

免疫沉淀 (IP) 利用抗体-抗原相互作用从混合物中分离出少量目的蛋白或其他生物分子进行分析。通常，目标分子是抗原，通过抗体结合抗原和螯合在基质（如琼脂糖磁珠）上的配基，然后通过孵育进行捕获。两种常见的 IP 方法为直接捕获和间接捕获。

• 直接法 = 预先螯合抗体法：在这种方法中，抗体预先附着在微球珠上。直接法可让您更好地控制抗体结合，并将抗体共价螯合在微球珠上。通过这种方式，您可以确保抗体不会洗脱并干扰后续分析。
• 间接法 = 游离抗体法：在这种方法中，添加微球珠之前，抗体与抗原一起孵育。间接法易于操作，步骤较少，并且在抗体不干扰后续步骤的情况下可以使用。

免疫沉淀有何用途？

在通过蛋白质印迹、液相层析或质谱法进行检测之前，使用免疫沉淀从细胞或组织裂解物中分离蛋白或其他生物分子。您还可以使用 IP 同时对多个样品进行快速、小规模的纯化，如抗体筛选实验。

免疫沉淀层析柱常见问题解答

以下是有关免疫沉淀层析柱的一些常见问题解答。

免疫沉淀层析柱有哪些用途？

在进行凝胶电泳、液相层析和 LC-MS 等下游蛋白分析之前，使用 Cytiva 的免疫沉淀层析柱制备蛋白样品。Cytiva 提供蛋白 A 和蛋白 G 层析柱和板，可结合不同物种的 IgG 蛋白。

为什么在免疫沉淀中使用微球珠？

在免疫沉淀过程中，与结合目标分子的配基偶联的微球珠与溶液（例如细胞提取物或裂解物）一起孵育，以允许结合。然后通过离心将微球珠从溶液中分离出来。琼脂糖微球珠具有较高的抗体结合载量，而磁珠易于操作，可缩短处理时间。然而，琼脂糖磁珠具有最便捷的处理方案和最优的结合载量。