特定基团亲和填料

蛋白质纯化是指从复杂混合物中分离出一种或多种蛋白质分子的过程。该过程可用于多种分析用途，例如表征蛋白质的结构和功能，也可用于制备目标分子，例如纯化单克隆抗体。蛋白质纯化利用了生物分子的多种物理和化学特性，包括形状、大小、电荷、疏水性和结合亲和力。制备级纯化可生产大量目标分子用于进一步的下游处理，而分析技术只能得到较少的分离物用于研究。

亲和层析

亲和层析是最常用的生物分子分离方法之一。该过程又称为亲和纯化，可基于目标分子（存在于流动相中）与配基（螯合在填料或纤维等基质上，称为固定相）之间的特异性及可逆性相互结合作用，从混合物中分离出生物分子物质。

亲和层析中常用的生物相互作用包括抗体与抗原、病毒或细胞的相互作用；金属离子与组氨酸 (his) 标签蛋白质的相互作用；谷胱甘肽与谷胱甘肽-S-转移酶或带 GST 标签的蛋白之间的相互作用；酶与底物类似物、抑制剂或辅因子的相互作用；或凝集素与多糖或糖蛋白的相互作用。

亲和层析也可用于去除特定污染物，例如凝血酶和 Xa 因子。

亲和层析期间会发生什么？

在亲和层析期间，让含有目标分子的液体（如细胞裂解液）流穿亲和填料、预装柱或纤维素单元，这些固定相中包含配基或目标分子结合伴侣。目标分子与配基结合，并持续与固定相结合，直至其被洗脱。

亲和填料常见问题解答

以下是有关亲和填料的一些常见问题解答。

亲和填料是由琼脂糖或其他材料制成的基质，可与结合了目标分子的亲和性配基发生偶联。

基团特异性亲和填料用于纯化特定的分子组，例如糖蛋白和凝血因子。基团特异性亲和填料对一组相关物质（而非单一类型的分子）具有亲和性。同一通用配基可用于纯化几种物质（例如同一类酶的不同成员），而无需为该分子组中的每种不同物质准备新的填料。同一分子组内的成员，要么存在结构相似性，要么存在功能相似性。基团特异性亲和填料或预装柱的特异性源于配基的选择性和选择性洗脱条件的使用。亲和填料或层析柱可用于纯化或去除目标物质。如果用于去除目标物质，则需在样品应用和洗涤过程中收集最终样品。

亲和纯化适用于多种应用场景，如核酸纯化和单克隆抗体 (mAb) 纯化。通过亲和纯化，您还可以纯化腺相关病毒 (AAV) 等病毒载体。亲和纯化的其他应用包括：

• 下游质粒加工
• 白蛋白纯化
• 多糖纯化
• 糖脂纯化
• 酶纯化

您可以使用 Cytiva 的 Purify 应用程序选择层析填料、层析柱、系统或附件。