在变性的条件下进行等电聚焦，可以得到最高的分辨率和背景干净的结果。尿素可易促进蛋白质溶解，并使大多数蛋白质折叠打开，是蛋白质处于完全无规则的构象，所有可电离基团均暴露于溶液中。2-D 样本溶液中尿素的浓度要不低于 8 M。