注：您是否在寻找层析填料动态结合载量的相关指南？您可以参阅以下文章：如何确定层析填料的动态结合载量 (DBC)？
纤维基质在亲和纯化方面相对于填料有多项优势，包括更适用于快速循环层析。纤维层析基质（例如 Fibro PrismA）结合大量蛋白的时间只有亲和填料所需纯化时间的几分之一。与填料一样，Fibro 单元的动态结合载量 (DBC) 会受到工艺条件和目标分子性质的影响。因此，测定 Fibro 单元的动态结合载量是一个非常关键的工艺步骤。
计算 mAb 进样量和所需基质量
计算层析步骤的 mAb 进样量时，需要知道层析单元的动态结合载量。通常将进样量设为 10% 穿透率时层析柱载量的 80%。将 Fibro-PrismA 的进样量范围定为层析柱载量的 80%，可允许单个层析单元的动态结合载量之间存在差异，并可避免层析单元经过大量循环之后因载量下降而导致回收率损失。
当纯化一定量的蛋白时，动态结合载量还可以帮助您确定需要用多少基质（无论是填料还是 Fibro 单元）。换言之，蛋白结合载量决定了给定体积或质量的 Fibro 基质或填料可以纯化多少蛋白。
Fibro PrismA 单元的动态结合载量
总的来说，我们观察到 Fibro PrismA 单元的动态结合载量较高，不受流速影响。而层析填料受压力/流速特征以及结合载量的限制，且传质受到颗粒中扩散能力的限制。如图 1 所示，Fibro-PrismA 的动态结合载量是恒定的，与流速无关。
图 1. Fibro-PrismA 和 MabSelect-PrismA™ 层析填料的 IgG 抗体结合载量与停留时间的函数关系。
HiTrap Fibro™ 和 HiScreen Fibro™ PrismA 层析单元的动态结合载量约为 30 g/L，该值因目标分子不同而存在一定差异。如图 2 所示，当我们测试 Fibro PrismA 捕获融合蛋白、双特异性抗体和单克隆抗体的性能时，观察到其动态结合载量的范围为 25 至 60 g/L。
图 2. 达到 10% 穿透率，且停留时间 <6 s 时，Fibro PrismA 对 Fc 融合蛋白、双特异性单克隆抗体 (mAb) 和 mAb 的动态结合载量 (g/L)。
我应该如何测定目标分子在 Fibro PrismA 中的动态结合载量？
以下一些技巧可以帮助您着手测定动态结合载量（可能存在一定差异，具体取决于您使用的 ÄKTA™ 层析系统）：
- 断开混合室，减少 ÄKTA™ 系统的滞留体积。
- 在 UNICORN™ 软件中将柱前压力限度设为 1.0 MPa。
- 绕过相关方法中的限流器，以降低压力。
- 将降噪/紫外线平均时间设为 0.2 s。
- 在使用下一种缓冲液替换前一种缓冲液的过程中，删除相关方法中所有的泵清洗/装填系统说明。
- 如果您使用预纯化分子测定动态结合载量，则需使用比平衡缓冲液中盐浓度更高的缓冲液来稀释您的样品。利用电导率的 50% 偏移来确定层析单元的延迟体积。延迟体积 ≠ 层析单元体积。
关于 Fibro PrismA 单元动态结合载量测定的详细说明，请参阅 HiTrap Fibro™ PrismA 和 HiScreen Fibro™ PrismA 使用说明书。