组分收集器

fixed volume and peak fractionation命令是指，在紫外峰出峰之前以fix volume的体积进行收集，一旦满足出峰条件就以peak fractionation的体积进行收集，紫外峰满足停止收集信号后，又回到fix volume的体积收集。fix volume和peak fractionation可以设置为不同的收集管类型，例如在紫外峰出峰前以大体积分装收集到体积较大的试管中，一旦出峰进入体积较小的试管中以小体积每管分装收集。

一般是因为系统进气导致流速不准，排查系统中泵和层析柱是否进气。

1. 首先将柱位阀bypass或者将层析柱从系统流路中拆下，无柱位阀时将进样阀和紫外检测器用管线相连，此时再次执行收集查看收集的实际体积是否与设置的体积相符，如果相符，说明层析柱中有大段空气。
2. 如果依然不符，则推测泵腔进气，手动对泵进行抽气，详细步骤，请点击此处。

新装机的设备，延迟体积已经由安装工程师测量和设置完成，使用期间不要更换模块之间的管线，不然延迟体积会有所变动。

如果模块位置、数量和连接管线进行了自行更换，可以查阅ÄKTA™ 的使用手册（user manual），查找从紫外监测器至收集器之间所连接的每个模块的内部体积，确认连接管线的内径和测量连接管线的长度，将模块内部体积和管道内部体积相加后得到延迟体积的数值。

在 System state 为 Ready 时，System Control → System → Settings → Tubing and Delay volumes，将在 Delay volume: Monitor to Frac 设置为计算后的体积，点击OK确认保存。如图1所示。

图1. 延迟体积的设置窗口

Minimum peak width即最短峰收集宽度。使用峰收集命令时，当触发收集命令后设备会以当前的设置值（最短峰收集宽度的单位为时间）持续进行收集，即使峰结束的条件提前触发也继续收集至设定值。在方法编辑中，当选择柱库中某一种预装柱时，其基于时间的最小峰宽有提供默认值，但此值可作为变量供用户自行修改。设置时以不超过目标峰层析峰的宽度来设置即可。

1. F9-R：当收集的样品还没有达到设定的收集体积，而需要换到下一管时，可以点击 Fraction collector → Feed tube → Execute以实现手动切换收集管功能。
2. F9-C：此收集器和ÄKTA™ avant内置收集器可根据需求选择Next tube下一管，Next Line下一行，Next cassette下一个收集盘架或者Skip two tubes跳两管。
3. F9-T：F9-T收集器可在Fraction collector F9-T中，选择Next position和Next plate进行收集管的切换。

除了Frac 和 Waste 位置外，ÄKTA™系统出口阀还有1个（单出口阀）或者10个出口（多出口阀）可以用来进行不同组分的大体积收集。

使用出口阀进行收集命令设置和使用收集器进行固定体积收集和峰收集设置类似，只需将收集命令改为Fractionation in outlet valve即可。

手动运行设备时，Manual Instructions对话框中设置峰收集参数，在System Control窗口Manual →Execute Manual Instructions，弹出的对话窗口

1. 在Peak Fractionation parameters 定义峰起始和结束收集的条件；
   在设置Peak Fractionation parameters中：
   1. Signal Source设置信号源，如UV的三个波长UV1-3的其中之一，电导，pH，外界设备信号analog，默认为UV1。
   2. Mode设置峰启动和结束的判定标准
      
      1. 选择Level则配合Start level 和End level设置数值来监测信号值是否超过Start level数值，一旦超过则触发收集，当信号检测数值不再创新高开始下降后，如果信号值低于设置的End level数值时则触发Peak End停止收集。
      2. 选择Slope则配合下面的Start slope 和End slope设置数值来监测信号的斜率是否超过Start slope数值，一旦超过则触发收集，当信号检测数值不再创新高而开始下降后，如果信号的斜率低于设置的End slope数值时则触发Peak End停止收集。
      3. 选择Level and Slope则要求信号的检测数值和斜率需要同时满足Start level和Start slope才能触发Peak Start开始收集，当信号检测数值不再创新高开始下降后，需要同时满足End level和End slope才能触发Peak End结束收集。
      4. 选择Level or Slope则要求信号的检测数值和斜率只要满足Start level或者Start slope其一就可以开始收集，当信号检测数值不再创新高开始下降后，只要满足End level或者End slope其一就触发Peak End结束收集。
   3. Minimum peak width设置最小的收集时间，即一旦触发Peak Start后即使很快触发了Peak End，也要经过Minimum peak width设置最小的收集时间后才会停止收集。
2. 然后在Fraction collector →Peak Fractionation 设置起峰后每管的收集体积；

   

   图1. Manual模式下峰收集参数的设置

   
   当编辑Method通过自动程序运行设备做实验时，在编辑方法过程中需要收集的时候勾选Fraction Collector，在Fractionation Type中选择Peak fractionation，点击Peak Frac Settings中选择Mode和填写对应的Start 和End的阈值，以及Minimum peak width时间，最后在Peak Fraction Size中设置Peak Start到Peak End之间的样品每管收集体积。Method编辑时，默认的信号为UV1。

   

   图2. Method Edit模式下峰收集参数的设置

ÄKTA共有三种收集模式，包括固定体积收集（Fixed volume fractionation）、峰收集（Peak fractionation）以及固定体积收集结合峰收集（Combined fixed volume fractionation and peak fractionation）。

1. 1. 固定体积收集
   在方法设置中，选择Fractionation type→ Fixed volume fractionation，在Fractionation destination及Fixed fractionation volume中选择使用的收集管/孔板类型及每管/孔收集体积，具体设置如图1（图中以F9-C收集器为例）。

   

   图 1 固定体积收集参数设置

2. 2. 峰收集
   在方法设置中，选择Fractionation type→ Peak fractionation，在Peak fractionation destination及Peak fractionation volume中选择使用的收集管/孔板类型及每管/孔收集体积，如图2（图中以F9-C收集器为例）所示。在峰收集模式下，点击Peak Frac Settings，跳出单独窗口下设置峰参数，如图3所示。

   

   图 2 峰收集参数设置

   

   图 3 峰参数设置

3. 3. 固定体积收集结合峰收集
   在方法设置中，选择Fractionation type→ Fixed volume and peak fractionation，在Fractionation destination及Fixed fractionation volume中选择固定体积收集时使用的收集管/孔板类型及每管/孔收集体积，在Peak fractionation destination及Peak fractionation volume中选择峰收集时使用的收集管/孔板类型及每管/孔收集体积，以上设置如图4所示，在峰收集时，点击Peak Frac Settings，在跳出的单独窗口中设置峰参数，如图3所示。

   

   图 4 固定体积结合峰收集参数设置

1. 仅在一个阶段 (Phase)设置了峰收集，进行峰收集时，峰尚未结束，当前阶段已结束，峰收集将随着阶段结束而停止。
2. 当峰收集参数设置的停止收集紫外level值大于开始收集紫外level值时，如果没有进一步在Text Instructions进行编辑设置，会出现仅在起峰一段收集，在Text Instruction进行编辑时，需要定义紫外峰越过峰尖（紫外峰跨过峰最大值） ，可在Text Instruction中加入一条命令，需要先达到Peak max，再触发收集终点紫外level终止收集，避免峰收集提前结束，设置如下图1。
   

   

   图 1 设置Peak max

3. 在进行峰收集时，紫外峰出现了小波动，使得系统认为峰结束因而停止收集。
4. 峰收集时设置使用Out口进行收集，Out口数量设置与峰数量设置不同，例如有2个峰需要分别收集，仅设置一个Out口收集，则第二个峰不会被收集。Out收集口数量设置如下图2所示。
   

   

   图 2 Out口收集设置更改

5. 在Text Instructions中编辑峰收集时，需要先编辑峰收集参数（Peak fractionation parameters），再给出Peak fractionation命令，如果两个命令顺序颠倒，则会按照默认峰收集参数进行收集，导致峰收集可能提前结束。

软件如果弹出“Drop sync sensor error. Please clean the drop sync sensor ...”，表明收集器上的探头脏了，需要进项清洁。针对不同的收集器类型，操作如下：

  1. 对于方形收集器F9-C和ÄKTA avant 25内置收集器F9，把图1标示为3的dispenser head cover 移除以后，将cover 清洁，并擦拭drop sync sensor，具体位置见图1中的5号。 请用棉签蘸纯水或者20%乙醇清洁Drop sync sensor，并尽快擦干。

图1. 方形收集器F9-C和ÄKTA avant 25内置收集器F9的滴头结构图

  2. 对于圆形收集器F9-R，请用棉签蘸纯水或者20%乙醇清洁Drop sync sensor，并尽快擦干。具体位置见图2中的红框处，从收集器小白板两侧进行清洁。对于F9-R， 除了清洁外，请确认管道末端是平的，露出长度正确，并完成锁定。另外，请注意收集液体时不要太满，以免液体溅起，最终腐蚀sensor。

图2. 圆形收集器F9-R的Drop sync sensor结构图

  3. 对于双板收集器F9-T，请用棉签蘸纯水或者20%乙醇清洁Drop sync sensor，并尽快擦干。具体位置见图3中的3号。拔出收集滴头接头，深入后对两侧进行清洁。

图3. 双板收集器F9-T的滴头结构图

对于F9-R收集器，没有直接适配1.5 ml EP管的支架。具体的处理方式如下：

1. 可使用适配12 mm试管的收集盘架（该盘架为圆形收集器标配），配合Eppendorf ™ Tube Holder（货号：18852201），并将1.5 mL EP管放置于tube holder内进行收集。
2. 可以将1.5 mL EP管置放于15 mL离心管内使用F9-R标配的盘架进行收集。

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用于12 mm试管的管支架（100个），适配1.5 ml-3 ml试管。

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圆形收集器开始执行收集命令时，UV紫外检测器到收集器滴头之间的管道和阀门内部液体总体积被称为延迟体积，延迟体积会被收集到当前收集器感应器的第1个收集管位置，保证样品的紫外吸收峰和收集管号一一对应。因此当次收集命令的第1号管号位并不显示在图谱中（ 如图1所示）。例如圆形收集器第一次收集在第5号管结束后，再次进行收集时，第6号管不会被显示，图谱从第7号管开始显示。延迟体积的参数设置方法，请点击此处。

图1.圆形收集器执行收集命令时的编号示意图

圆形收集器的收集臂小白板为Tube Sensor，如果没有感受到Tube则会出现滑管跳管现象，并且可能会出现报错：In order to continue, the filled tubes have to be replaced or fractionation has to be manually stopped。
查看收集臂小白板是否脏污，20%乙醇的毛巾擦拭小白板至干净，晾干后使用。使用圆形收集器时，须保证小白板干净和干燥，小白板上有水平的刻度，收集管口贴住小白板，并略低于刻度位置（如图1）。

图1. 圆形收集器试管摆放方式

ÄKTA™ pure方形灵活收集器F-9C在15 ml和50 ml离心管收集时，收集器滴头不会正对管口中心进行收集，避免在接近收满时，液体滴溅到管外，而是偏离中心略靠近管壁进行收集，如图1所示，因此为正常现象。

图1. 收集器的滴头靠近15ml管壁滴液体

当系统处于 Ready 状态时，在 System Control → System → Settings → Fraction collection → Fraction collector lamp，选择 On 则开灯，选择 Off 则关灯，点击 OK 确认。

收集器在执行收集命令时，是从紫外监测器监测样品开始收集。从紫外监测器到收集器滴头的体积为延迟体积，执行收集命令后，这部分体积从废液口排出，因此需要等到样品从紫外监测器到达收集器滴头时才移动到对应的收集试管里进行滴入收集。

ÄKTA™ pure方形灵活收集器F9-C在收集时，延迟体积的液体将从收集器的废液口流出，通过半透明的较粗软管（如图1）排出，请查看机身后面的废液管是否接入废液缸，不能被挤压堵塞。

图1. ÄKTA™ pure方形灵活收集器废液管

ÄKTA™ pure在实验进行时不能增减收集管架数量，也不允许调整收集管架的种类和位置（同类型管架除外），收集时也不能指定从某一个管号开始收集，如果想让收集器从第一个位置第一号管开始收集，在确认收集架上都是未被使用的新管后，在 System  Control  → Manual  → Execute Manual Instructions  → Fraction collection  → Reset tube type  →对应的 Tube type  → Execute 运行，清除收集器对已用收集管的记忆。点击 End 结束实验后，收集器只有打开门并合上门让收集器重新扫描收集架后，才能自动清除已用收集管的记忆，下次收集也会自动从第一个位置第一号管开始收集。

若需对F9-C或avant内置收集器滴头进行清洗，在Manual Instructions内，点击Fraction collector → Frac cleaning position → Execute将收集器滴头调整到前排中间的位置，以方便清洗。

ÄKTA™ avant收集器在15 ml和50 ml离心管收集时，收集器滴头不会正对管口中心进行收集，避免在接近收满时，液体滴溅到管外，而是偏离中心略靠近管壁收集，如图1所示，因此为正常现象。

图1. 收集器的滴头靠近15 ml管壁滴液体

ÄKTA™ avant收集器在收集时，延迟体积的液体将从收集器的废液口流出，通过半透明的较粗软管（如图1）排出，请查看机身后面的三根半透明较粗的软管是否接入废液缸，不能被挤压堵塞。

图1. ÄKTA™ avant的三根半透明较粗软管放入废液缸中

首先正确设置ÄKTA™ avant收集器的温控参数（6-20℃）。

如果设置后温度没有到达设置的温度，请进行以下操作：

1. 查看收集器最内部的通风口的风扇是否工作（图1），如果没有在转动，请联系您身边的OptiRun售后支持团队。
2. 查看设备背部的散热口（图2）是否有杂物堵塞，保持设备距离墙面有一定距离，并且保证散热口没有被堵塞。

图1. ÄKTA™ avant 收集器最内部风扇口

图2. ÄKTA™ avant 设备背部散射口

当系统处于 ready 状态时，在 System Control → System → Settings → Fraction collection → Fraction collector lamp，选择 On 则开灯，选择 Off 则关灯，点击 OK 确认。

收集器在执行收集命令时，是从紫外监测器监测样品开始收集，从紫外监测器到收集器滴头的体积为延迟体积。执行收集命令后，这部分体积从废液口排出，因此需要等到样品从紫外监测器到达收集器滴头时才移动到对应的收集试管里进行滴入收集。

ÄKTA™ avant收集器中没有放置收集架，或者放入的收集架没有被正确识别。

在 System Control 界面，View 下拉菜单，选择 Fraction Collection Content，弹出的窗口查看是否有识别的收集架或显示为红叉。当出现红叉时应点击End结束此次实验，打开收集器门后放入收集架，让设备再次识别收集架，正常识别后 Manual Instruction 命令窗口则会显示 Fractionation 和 Peak fractionation 收集命令。无论是运行程序方法或手动实验时，须在执行第一个命令前先放置收集架并被正确识别，才能在后续的实验中使用收集器。

图1. 收集器正常识别收集架

执行 accumulator wash 命令：

1. 在 System Control 页面，选择 Manual → Execute Manual Instructions → Fraction collection → Fraction collector wash, 点击 Execute，以完成内部管路清洗。

   注意：

   1. 在收集器进行清洗时，请将系统调至旁路流路，不要过柱。
   2. 如果在清洗过程中系统压力不断提升，请在 Fraction collector wash settings 中将     收集器清洗速度降低，确保清洗时的流速不会导致系统各模块超压。
2. 在 System Control 页面，选择 Manual → Execute Manual Instructions → Fraction collection → Frac cleaning position，点击 Execute。

   收集器滴头将移至清洗位置，机器显示当前状态为 System pause。

3. 打开收集器门，移走内部管架。
4. 用水或中性清洗剂清洗托盘盒或管架。
5. 将储液槽取出，并使用水或中性清洗剂清洗完毕后，将储液槽再次放回。
6. 使用湿布擦洗收集器内部，并用中性清洗剂或20%乙醇擦拭内部污渍。
7. 用水或20% 乙醇浸润的湿布擦拭滴头上的二极管感应器 (滴同步感应器和自动识别管架感应器）。
8. 在运行前确保收集器完全干燥。
9. 关闭收集器门，系统此时会开启自动扫描。
10. 在系统控制模式下，点击 End 按钮，此时滴头将会移至 home 位置。

ÄKTA™ avant 在实验进行时不能增减收集管架数量，也不允许调整收集管架的种类和位置（同类型管架除外），收集时也不能指定从某一个管号开始收集，如果想让收集器从第一个位置第一号管开始收集，在确认收集架上都是未被使用的新管后，System  Control → Manual → Execute Manual Instructions → Fraction collection → Reset tube type →对应的 Tube type → Execute 运行，清除收集器对已用收集管的记忆。在点击 End 结束实验后，收集器只有打开门并合上门让收集器重新扫描收集架后，才能自动清除已用收集管的记忆，下次收集也会自动从第一个位置第一号管开始收集。

ÄKTA™ avant可以对收集器的温度进行控制，在Manual Instructions内点击Fraction collector → Fraction collector temperature 选择Mode 为On即可打开收集器的温控功能，在Target 输入目标温度，Insert → Execute即可。