作者：Qiujin Liang et al.
发表日期：2017年4月
发表期刊：Biotechnol Lett
研究背景
纯化后的蛋白酶如果固定在填料上，会比游离的具有更长的稳定性，耐受广泛的温度条件、pH范围，化学试剂，同时可以多次使用，提高底物/酶的比例，提高酶的使用效率和寿命。Ulp1是SUMO标签重组蛋白常用的标签切除蛋白酶，将Ulp1偶联到NHS预活化填料上，能够极大的提高酶的适用条件和酶的稳定性。利用固定化的Ulp1酶和游离的酶进行活性对比，发现固定化的Ulp1酶可以耐受高达15% DMSO的缓冲液环境，但是游离的Ulp1在5-15% DMSO环境下，酶活受到了明显的抑制。固定化了的Ulp1酶比游离的酶更具有热稳定性，在37度存放24 h后，游离的酶只剩16%活性，存放36 h后只剩14%活性，而固定化的酶在37度存放36 h仍具有96%活性。游离的酶在pH 10.5只具有23%活性，而固定化的酶在pH 10.5具有100%活性。固定化的Ulp1酶经过测定在使用了15次后，仍具有90%活性。诸多测试表明蛋白酶被预活化填料偶联固定后，稳定性，酶活条件和寿命明显变优。
实验方法
带His标签的Ulp1 (403-621) 构建到载体后用大肠杆菌原核表达后，破碎的菌体用Ni柱进行捕获，然后经过QFF纯化，按照说明书的操作流程将纯化后的Ulp1与NHS，CHO和CNBr三种预活化填料偶联，考察偶联效率，最终筛选出NHS最适合偶联Ulp1酶，偶联量为1 mL的填料偶联了1.68 mg的Ulp1酶。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17071701 | HiTrap NHS activated HP | 1 × 5 mL |
| 预装柱 | 17525501 | HisTrap FF | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 17515601 | HiTrap Q FF | 5 × 5 mL |
| 填料 | 17090602 | NHS activated Sepharose 4 FF | 500 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
