脱盐和缓冲液置换

脱盐和缓冲液置换

脱盐是指将可溶性大分子（例如蛋白和核酸）与盐和其他小分子分离。缓冲液置换是指用合适的缓冲液系统替换原有缓冲液系统，从而在最终应用场景（例如测定）中高效地进行下游处理或使用。通过凝胶过滤层析技术，同一种填料可用于上述两种用途。进行缓冲液置换和脱盐时，样品中的大分子组分会在预先使用的平衡凝胶过滤填料的缓冲液中被回收。

在科研和生物制药领域，脱盐和缓冲液置换的常见用途包括：

• 从蛋白样品中去除盐类
• 从核酸中去除未结合的核苷酸或苯酚
• 从欧联蛋白样品中中去除多余的标记或欧联试剂

脱盐柱缓冲液置换用于以下应用的样品制备，例如：

• 亲和层析
• 离子交换层析 (IEX)
• 电泳

脱盐和缓冲液置换原理

缓冲液置换和脱盐技术利用排阻极限和分子量临界值 (MWCO) 进行有效的分子分离。低于分子量临界值的分子可以扩散到填料孔隙中，而大分子则保留在脱盐柱的外水体积中。

层析柱具有足够的长度和体积，能够将大分子与盐和小分子分离。用带有微孔的填料装填脱盐柱，以确保目标分子能在外水体积中洗脱出来。典型的缓冲液置换和脱盐，需要分子量临界值为5到10 KDa的填料一些其他应用（例如肽类分离）会使用更大排阻极限的填料。

关于脱盐柱的常见问题及解答

以下是有关脱盐柱的一些常见问题和解答。

脱盐柱有哪些用途？

脱盐柱可用于与蛋白和核酸相关的操作。脱盐柱可以快速简便地从较小的分子和盐中纯化得到生物分子。在研究实验室中，一次性脱盐柱通常用于小量样品的分离。一种用途是在酶促反应后，进行苯酚抽提，以去除多余的核苷酸和酶。

怎样使用脱盐柱？

在使用脱盐柱时，您可以将目标分子回收于预先平衡凝胶过滤填料的缓冲液中。在研究实验室中，通过离心作用进行分离的离心式分离柱很常见。另一种选择是使用重力柱，有时被称为滴滤柱。对于生物制药用途，通常使用自动化层析系统和相应的层析柱。

脱盐缓冲液置换和透析之间有什么区别？

脱盐缓冲液置换和透析均根据分子大小进行分离，适用于类似的应用。然而，凝胶过滤速度更快，只需要几分钟就能完成，而透析技术需要数小时。脱盐缓冲液置换能从体积相对较小的样品中去除污染物。透析需要将样本放入管路或槽内。有时候需在装有透析单元的容器中进行多次缓冲液置换。

如何对脱盐柱进行离心？

您可以使用标准离心机或微型离心机对脱盐柱进行离心。我们提供适用于不同样品体积的不同尺寸的离心式分离柱。

什么是凝胶过滤？

凝胶过滤是一种尺寸排阻层析 (SEC) 技术，该技术基于各组分的分子量或尺寸差异将其分离。

我应该如何优化蛋白脱盐操作？

这篇文章提供了一些关于蛋白脱盐的技巧。