液相层析

液相层析是从复杂混合物中分离组分的分析或制备技术。流动相（在这种情况下为液体）流过固定相，固定相可以是装有填料或其他基质（例如电纺丝纤维素纤维）的层析柱。层析可以根据形状、粒径、电荷、分子结构及与固定相的结合亲和力来纯化和分析生物分子。

反相层析

反相层析根据物质与层析介质疏水表面的可逆相互作用，分离疏水性质不同的蛋白质和肽。由于反相基质的内在性质，其结合通常非常强。反相层析通常用于寡核苷酸和肽的最终精纯，非常适合分析分离，例如肽谱分析。

反相层析常见问题解答

以下是有关反相层析的一些常见问题解答。

反相层析使用填充有非极性疏水填料（如聚苯乙烯/二乙烯苯颗粒）的层析柱。

样品在加载至层析柱时发生结合。可通过使用有机溶剂和其他添加剂（离子配对剂）来调节结合情况。然后改变条件，使结合物质呈现不同程度的洗脱。洗脱通常通过增加有机溶剂浓度来进行，最常见的是乙腈。样品在结合和分离过程中浓缩，以纯化浓缩形式收集。

反相层析和疏水层析 (HIC) 两者都基于生物分子表面上的疏水性区域与层析介质的疏水表面之间的相互作用。然而，在实践中，这两种技术截然不同。反相层析介质的表面疏水性通常高于 HIC 介质的表面疏水性，因此相互作用更强，如需成功洗脱，必须使用非极性有机溶剂（如乙腈或甲醇）来逆转。HIC 介质是一种利用生物分子疏水属性的替代方法，在极性更强、变性程度更低的环境中实现洗脱。