通用问题

建议按照彩页推荐HiTrap或HiPrep 柱形的层析柱（如下图），如需使用其他类型层析柱，请和当地ÄKTA™ 技术支持咨询。

图1. ÄKTA™ start适配柱型

ÄKTA™ start 是一个用于实验室规模蛋白质纯化的制备型层析系统，其最大系统压力不能超过0.5 MPa，因此需要注意所使用层析柱的耐受系统压不能超过0.5 MPa。ÄKTA™ start 适用于 HiTrap 和 HiPrep 层析柱家族成员 。HiTrap 1 和 5 mL 层析柱预先填装了各种层析填料，以便使用各种层析技术进行纯化。

  1. 使用 HiTrap 层析柱适用于AC、IEX 和 DS，HiTrap 层析柱专为提高纯化分辨率和重现性而设计。
  2. 使用HiPrep 预装柱设计可用于简易的纯化放大，如使用 HiPrep Sephacryl 层析柱进行凝胶过滤可精纯样品，获得更高纯度、均一性的目标蛋白。HiPrep Desalting脱盐柱也可在 ÄKTA™ start 系统上使用，层析柱体积为53 mL，可进行多达15 mL 样品的脱盐/缓冲液置换处理。
  3. ÄKTA™ start 还支持使用其他的层析柱，包括 HisTrap、StrepTrap、 MBPTrap和GSTrap层析柱。

ÄKTA™ 实验室级别设备可以实现多样品的依次连续进样，取决于设备的配置。若设备上配有Loop环阀，可实现5个小体积样品的连续进样；若设备上配有样品泵和样品泵入口阀，可实现大体积的7个样品的连续进样；若需要更多样品的连续进样，可配置ALIAS™自动进样器与ÄKTA™设备搭配使用，最多可实现108个样品的连续进样。

相关产品：ALIAS™ 自动进样器

ÄKTA™ 层析系统可以放置在层析冷柜中运行来保证样品处于低温，为保证仪器的正常运行，冷柜需注意以下几点：

  1. 层析冷柜尺寸要求：
    1. ÄKTA™ pure 的主机尺寸为：W × H × D= 535 × 630 × 470 mm 。
    2. ÄKTA™ avant 的主机尺寸为：W × H × D= 860 × 660 × 710 mm。
    3. ÄKTA™ go 的主机尺寸为：W × H × D= 335 × 482 × 464 mm。
    4. ÄKTA™ start 的主机尺寸为：W × H × D= 270 × 285 × 280 mm。

    层析冷柜宽高深需大于此尺寸且预留电线和柱子的位置。

  2. 层析冷柜的功能要求：
    1. 避免冷凝水：冷柜须有除湿功能，在设备接通电源时，避免冷凝水的产生。
    2. 避免过热：当关闭冷柜或冷室电源，ÄKTA™ 层析系统放置其中时，确保仪器关闭或冷柜门打开，防止温度过高。
    3. 避免频繁开关冷柜：避免频繁开关冷柜造成的冷凝水。

ÄKTA™ 设备可以进行反相层析实验。搭配 RESOURCE RPC 系列预装柱和填料，主要用于蛋白、肽和寡核苷酸的高分辨分离和分析。反相层析所能达到的分离效果，尤其是分辨率，受柱子柱效和柱高等因素影响。因此建议使用预装柱，特别是填料粒径为 15 μm 的 SOURCE 15 RPC。由于填料粒径小，当柱高到达一定值时，正常工作柱压较高（RESOURCE RPC 6.4/100 的耐压为 10 MPa），所以当工作压力大于 5 MPa 时，应搭配 ÄKTA™ avant 25和 ÄKTA™ pure 25系统使用。     

ÄKTA™ 对有机溶剂使用有一定的限制，常规的乙腈、甲醇等可以在 ÄKTA™ 上正常使用（具体有机溶剂耐受表请参考用户手册）。使用有机溶剂，建议设备更换为耐受有机溶剂的密封圈（货号 29011326，O-ring 13.1 x 1.6 mm 高耐受），同时使用圆形收集器 F9-R 或双孔板收集器 F9-T，方形收集器 F9-C 由于是密封式收集器，所以不可用于反相层析。Cytiva 同时还有粒径 30 μm 的 SOURCE 30 RPC 填料满足不同应用需求。

相关产品：

O-ring 13.1 x 1.6 mm High resistance

SOURCE 15 RPC

RESOURCE RPC

SOURCE 30 RPC

  1. 打开 Cytiva中文官网；
  2. 搜索 ÄKTA™ 型号，进入产品主页后，点击相关文档；
  3. 下载 User Manual。

为了避免系统压力升高，实验过程中需要注意以下事项：

  1. 实验缓冲液及样品均需使用 0.22 /0.45 μm 滤膜过滤；当样品小于 1 mL 时，可将样品高速离心（ ≥10 000 g，10 min ）后，取上清上样。点击这里查看更多样品过滤知识。
  2. 实验运行结束后务必及时使用 ddH2O 及 20% 乙醇冲洗并保存系统，切勿将实验缓冲液静置于系统中。
  3. 所有的层析柱、填料均有建议的 CIP 频率及步骤，良好的层析柱维护程序可保证层析柱可以在较长时间内维持良好的性能。

系统清洗

在一次方法运行结束后，应执行下列操作：

  1. 使用 System CIP，以一种或多种清洗溶液（例如 NaOH、缓冲液或蒸馏水）冲洗流路。

    注意：在清洗系统的过程中，设置好仪器的报警压力，以免对各监测器造成损坏。

  2. 清空组分收集器。
  3. 使用湿棉纸清洁设备表面和工作台上的所有溢出物。
  4. 清空废液容器。
  5. 清洗进样阀的手动注射端口。
  6. 手动清洗 pH 电极，并确保其保存于适当的保存液中。

系统保存

如果仪器在数天或更长的时间内都不会再使用，还应执行下列操作：

  1. 使用 System CIP，向系统和缓冲液及样品入口管注入20% 的乙醇。
  2. 根据 ÄKTA™ pure User Manual 中所述准备 pH 电极保护液以便长久存放。推荐的电极保护液如下： 1:1 pH 4 buffer 和 1 M KNO3，或饱和 KCl 溶液。

在 ÄKTA™ 层析系统使用过程中，须确保层析系统流路中没有气泡以避免损坏层析柱。 若运行过程中系统进了气泡，可按照以下方法处理：

发现系统出现气泡后，首先暂停正在运行的实验，检查气泡所处的位置：

  1. 若气泡位于入口管道中且尚未进入泵头

    使用泵冲洗的命令排出气泡，具体操作为在 System Control → Manual → Execute Manual Instructions，在跳出的 Manual Instructions 窗口中，选择 pump → pump wash，选择需要冲洗的缓冲液入口，点击 Execute，进行泵的自动冲洗排气，在泵冲洗过程中，确认废液管道 W1 有连续液体流出，无周期卡顿，泵冲洗会自动结束，然后系统延续泵冲洗前的状态。

    若泵冲洗过程中发现 W1 无液体流出，在泵冲洗结束后进行泵头手动抽气。详细请点击此处。

  2. 若气泡已进入泵头尚未进入层析柱

    此时通过泵冲洗的命令一般无法将气泡排出，可直接进行泵头手动抽气，详情请点击此处，抽气后再运行泵冲洗命令，保证气泡完全排出。

  3. 若气泡已经进入层析柱

    首先按照2中的方法对系统进行排气，系统确保无气泡之后反向连接层析柱（若系统有柱位阀，可直接将层析柱流向切换为 up flow），使缓冲液流向为从下往上，之后点击 System Control → Manual → Execute Manual Instructions，在跳出的 Manual Instructions 窗口中，选择 pump → system flow，设置流速为 1ml/min，点击继续运行，直至肉眼看层析柱中无明显气泡且紫外曲线维持稳定可认为已将气泡排出。可运行实验查看分离效果。

    注意：若层析柱进入气泡较多且时间较长，有可能已经对填料造成不可逆的伤害无法恢复，具体可由冲洗后层析柱能否满足分离要求决定。

进入ÄKTA™系统的溶液：

需要用0.45 μm或0.22 μm的滤膜进行过滤来去除大颗粒和不溶物。过滤后进行超声除气。

进入ÄKTA™ 系统的样品：

对于大体积的样品，可以通过0.22或0.45 μm的滤膜过滤去除不溶物。

Cytiva有四种不同规格和孔径的针头式滤器供大家选择。

对于小体积样品，考虑到过滤可能造成的损失，可以通过高速离心（13000 rpm，4 ℃，5-15  min）的方式去除沉淀或不溶物。

相关产品：ÄKTA™ 色谱系统的蛋白质制备

Method run中，拉梯度已经结束，但样品没洗下来，原因可能是B泵进气，导致Elution buffer没有被泵入流路中，从而未能将样品洗脱下来。解决方法：对B泵和对应的入口管路进行排气。具体排气方法，点击此链接。